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 大腸埃希氏菌和耐熱大腸菌群測(cè)試片使用說(shuō)明書(shū)

 1.適用范圍：適用于各種水樣中大腸埃希氏菌和耐熱大腸菌群的快速檢驗(yàn)

2.方法原理：耐熱大腸菌群（thermotoletant coliform  bacteria）是總大腸菌群的一部分．將培養(yǎng)溫度提高到44～45℃，在此條件下仍能生長(zhǎng)和發(fā)酵乳糖的菌群被稱(chēng)為耐熱大腸菌群。它們由埃希氏菌屬以及克雷伯菌屬、腸桿菌屬和檸檬酸桿菌屬中的一些菌種組成。其中大腸埃希氏菌（E.coli） 是zui準(zhǔn)確和專(zhuān)一的糞便污染指示菌。與總大腸菌群相比，耐熱大腸菌群在水體中的檢出，說(shuō)明水體更為不清潔，存在腸道致病菌和食物中毒菌的可能性更大。大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測(cè)試片運(yùn)用酶底物技術(shù)，含有大腸埃希氏菌*葡萄糖醛酸酶（glucuronidase）的顯色底物（XGLUC/blue），以及耐熱大腸菌群半乳糖苷酶（galactosidase）的顯色底物（SalmonGal/red）, 經(jīng)過(guò)44.5℃培養(yǎng)后，大腸埃希氏菌顯紫藍(lán)色，紅色或紫藍(lán)色菌斑都屬耐熱大腸菌群。
3 操作方法

3.1對(duì)于大腸菌群檢驗(yàn)顯示陽(yáng)性的紙片或產(chǎn)酸產(chǎn)氣的發(fā)酵管，用接種環(huán)挑取菌液，轉(zhuǎn)入2－3mL無(wú)菌水中混勻，用滅菌吸管吸取1mL慢慢均勻地滴加到大腸埃希氏菌耐熱大腸菌群測(cè)試片上，然后放下上層膜，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下。

3.2將接種好的紙片平放于培養(yǎng)箱中，44.5℃培養(yǎng)15～24h觀察結(jié)果。

4 結(jié)果判讀: 測(cè)試片上出現(xiàn)紅色或紫藍(lán)色菌斑都是耐熱大腸菌群陽(yáng)性，其中紫藍(lán)色為大腸埃希氏菌陽(yáng)性。沒(méi)有紅色或紫藍(lán)色斑點(diǎn)為陰性結(jié)果。

十、致病菌檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明

1適用范圍：適用于生活飲用水、水源水及食品中致病性沙門(mén)氏菌、金黃色葡萄球菌、副溶血弧菌、致瀉大腸埃希氏菌（含腸出血性大腸桿菌O157:H7）、臘樣芽孢桿菌、板奇腸桿菌檢測(cè)的檢測(cè)以及大腸菌群污染程度的檢測(cè)。

2方法原理：依據(jù)國(guó)標(biāo)GB/T4789.3.4.5.6.7.10.14-2003方法，采用包被技術(shù)將相對(duì)應(yīng)培養(yǎng)基包被在試劑盒底部，隨時(shí)取用。

3樣品稀釋?zhuān)?/span>同國(guó)標(biāo)法。液體樣品取原液。固體或半固體樣品用滅菌生理鹽水配制成1:10和1:100的稀釋液。

4 致病菌檢測(cè)

4.1加樣：用滅菌吸管吸取原液或1:10樣品稀釋液4ml～10 ml（不得少于4ml）分別加入到標(biāo)號(hào)為1、2、3、A、B、C的增菌格（孔）內(nèi)。加樣后的1、2、3號(hào)分別為副溶血弧菌、致瀉大腸埃希菌、板奇腸桿菌增菌液；A、B、C分別為金黃色葡萄球菌、沙門(mén)菌、臘樣芽孢桿菌增菌液。

4.2培養(yǎng)：將加樣后的試劑盒蓋上蓋，平放在36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18小時(shí)。

4.3 觀察結(jié)果：如果某致病菌的增菌液發(fā)生渾濁，即預(yù)示含有此種致病菌?？砂磭?guó)標(biāo)法進(jìn)一步檢測(cè)。也可取陽(yáng)性菌液1mL，加入到含有9 mL滅菌生理鹽的試管內(nèi)，混勻，取1mL，接種到相對(duì)應(yīng)的測(cè)試片上，36℃±1℃培養(yǎng)18小時(shí)加以驗(yàn)證。

5大腸菌檢測(cè)

5.1加樣：將試劑盒放在試驗(yàn)臺(tái)面上，打開(kāi)盒蓋，用滅菌吸管分別吸取3個(gè)原液或1:10樣品稀釋液1ml加到標(biāo)號(hào)為4、5、6的小培養(yǎng)基孔內(nèi)。另用滅菌吸管分別吸取3個(gè)1:10或1:100的樣品稀釋液1ml加到標(biāo)號(hào)為7、8、9的小培養(yǎng)基孔內(nèi)，標(biāo)號(hào)為10的小培養(yǎng)基孔內(nèi)可加入1ml滅菌生理鹽水作為培養(yǎng)基陰性對(duì)照孔使用。

5.2排氣泡：加樣后集氣窗內(nèi)如有氣泡存在，可將試劑盒以30～45度角傾斜使氣泡排出，必要時(shí)可輕輕用力在桌面上敲擊數(shù)下排出氣泡。

5.3培養(yǎng)：將加樣后的試劑盒蓋上蓋，平放在36℃±1℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)18～24小時(shí)。

5.4觀察結(jié)果：樣液變?yōu)辄S色為產(chǎn)酸、集氣窗中有氣泡為產(chǎn)氣，產(chǎn)酸產(chǎn)氣者為陽(yáng)性結(jié)果，陽(yáng)性結(jié)果的孔數(shù)越多，說(shuō)明污染越嚴(yán)重。

6 注意事項(xiàng)

6.1致病菌檢測(cè)與大腸菌檢測(cè)可同時(shí)進(jìn)行；加入樣品后不需搖勻；大腸菌檢測(cè)培養(yǎng)前一定要排氣泡，排氣泡的方法與結(jié)果觀察可參見(jiàn)大腸菌試劑盒使用說(shuō)明中的圖像顯示；在培養(yǎng)箱中取試劑盒時(shí)注意平托出來(lái)，避免由于試劑盒的傾斜使大腸菌陽(yáng)性集氣窗中的氣泡流失而影響結(jié)果判斷。

6.2試劑盒為一次性無(wú)菌包裝用品，供一次性即開(kāi)即用，。

7 保存條件和有效期：避光保存于陰涼干燥處，*溫度為2～8℃，有效期18個(gè)月。